up
Search      menu
تولید و کشاورزی :: مقاله کشت بافت خانگي PDF
QR code - کشت بافت خانگي

کشت بافت خانگي

آموزش علمي کشت بافت

مقدمه ( گيلاس )
اقلام مورد نياز براي کشت بافت خانگي
آمايش واسطه اي
ضد عفوني ادوات و ديگر اقلام
ضد عفوني مواد گياهي
عملياتي در جعبه هاي سترون
مقدمه
تکثير ذره اي، جايگزين مهمي براي شيوه هاي مرسوم تکثير گياه مي باشد.
اين تکثير، فرآوري گياهان را از بخش هاي خيلي کوچک گياه، در بر مي گيرد ( براي مثال : جوانه ها، گره ها، قطعات برگ، قطعات ريشه، و غيره ) که بطور ضد عفوني شده ( عاري از هر گونه ميکروارگانيسم ) در ظرف کشت، در جايي که محيط و مواد غذايي مي توانند کنترل شوند، رشد مي کنند. گياهان حاصله، از نظر ژنتيکي، همانند گياهان والدين مي باشند.
در حالي که در آزمايشگاه تحقيقاتي، همچون آنها در کشاورزي، و علم خاک در UNE، ما تجهيزاتي با فناوري خيلي پيشرفته را به کار مي بريم تا به فرآوري گياه، از طريق کشت بافت دست يابيم. اين مهم است که در نظر بگيريم که باغبانان زيادي، و علاقمندان به اين کار، مي توانند ادوات و تجهيزات با فناوري پيشرفته را با القام معمولي خانگي جايگزين کنند.
اقلام مورد نياز براي کشت بافت خانگي
1. يک جعبه ي سترون با هواي راکد، جهت انتقال گياهان به کار مي رود. يک حوض ماهي در يکسوي آن، جعبه ي انتقالي ايده آلي را بوجود مي آورد. هر پلاستيک يا محفظه ي شيشه اي، با اندازه هاي 50 سانتيمتر ( طول )، 40 سانتيمتر ( ارتفاع )، و 40 سانتيمتر ( عمق )، به راحتي مي تواند داخل جعبه ي انتقالي ايجاد شوند.
2. ديگ زودپزي براي ضدعفوني کردن واسطه ها، ادوات، آب، دستمال کاغذي و غيره.
3. قالب هاي شيشه اي ( قالب هاي غذاي کودک عالي مي باشند ) و ظروف خوراکي دور ريخته، با سرپوش هايي که نسبت به گرما، درون ديگ هاي زودپز مقاوم مي باشند، ظروف ايده آلي جهت استفاده مي باشند.
4. اسکالپل و پنس
5. دستمال کاغذي يا حتي کاغذ نسخه ي سفيد A4 ، با اندازه هاي تقليل يافته، مي توانند ضد عفوني ( سترون ) شوند، و براي سطح برش ستروني مورد استفاده قرار گيرند.
6. يک چراغ الکلي داراي الکل اتيليک(اتانول)، جهت شعله ور کردن ادوات ( از به کارگيري الکل متيليک (متانول)، بپرهيزيد زيرا که آن سمي مي باشد ).
7. شيشه ي (بطري) افشانک دستي، شامل 70% محلول الکل مي باشد تا سوختگاه ( محفظه ) انتقال، و سطوح ديگري مي باشد تا اسپري پاشي کنند.
8. محلول کلر رقيق، 4 1 رقت سفيد کننده هاي خانگي، ( براي مثال: White King)، براي استفاده در سطوح سترون مواد گياهي.
9. هر نوع ضد عفوني کننده ي پوست، براي مثال : Hibitane ( قابل حصول از هر داروخانه اي ).
10. واسطه ها ( به قسمت زيرين نگاه کنيد ).
آمايش واسطه ها
همه ي عناصري که در زير ارائه شده اند، مي توانند از سوپرمارکت ها، داروخانه ها و فروشگاههاي لوازم بهداشتي، خريداري شوند.
1. دو فنجان آب باران
2. يک چهارم فنجان شکر
3. مايه ي کود شيميايي: 2 1 قاشق سوپخوري همه منظوره 10:10:10( N.P.K.) کود شيميايي قابل حل در آب در 1 ليتر از آب: يک فنجان از مايه را براي اين دستورالعمل به کار بريد.
4. قرص انوزيتول ( 500 mg ) : 2 1 قرص
5. قرص ويتامين با تيامين : 2 1 قرص – هر نوع قرص مولتي ويتاميني مي تواند استفاده شود.
6. پولک هاي ( فلس ها ) آگار : 4 قاشق سوپخوري
اين واسطه ي بنيادي ( اساسي ) مي باشد. براي آمايش تکثير و ريشه دهي ( شيار زني )
واسطه، 2 1 فنجان شير نارگيل و 2 1 قاشق سوپخوري مالت مي افزايد.
شير نارگيل را با 2 1 فنجان پوره ي گوجه فرنگي سبز يا 2 1 فنجان آب ميوه ي تر و تازه جايگزين کنيد
آب پرتقال مي تواند واکنش هاي متفاوتي را ايجاد کند. از اين اطمينان حاصل کنيد که pH محيط کشت هميشه بين 5 و 6 باشد، تا pH با ميزان محدودي را که شاخص اندازه ي pH با ميزان وزن خالص باشد را اگر لازم باشد با اسيد، براي مثال : اسيد سيتريک يا باز، براي مثال : بي کربنات سديم، به کار برد.
عناصر را در روغن دان ( ماهيتابه ) ترکيب کنيد، و به آرامي بجوشانيد تا زماني که آگار حل شده باشد؛ مرتباً آنها را به هم بزنيد تا از چسبيدن آگار جلوگيري به عمل آوريد و متعاقباً زير ماهيتابه را به اشتعال در آوريد. براي پخش کردن آنها داخل قالب هاي شيشه اي، از يک ملاقه ( چمچه ) استفاده کنيد تا اينکه محيط کشت حدود 2 سانتيمتر عمق پيدا کند.
در يک ديگ زودپزي اختفا کنيد و پرورش دهيد. به مدت 15 دقيقه پس از اينکه فشاري حاصل شد، بپزيد. ( اين زماني حاصل خواهد شد که دريچه ي فشار اجازه ي بيرون آمدن بخار را مي دهد ).
ضد عفوني کردن ادوات و اقلام ديگر
پنس و اسکالپل مي توانند با شستشو در محلول کلر يا با فرو بردن در الکل يا شعله، ضد عفوني شوند.
آب سترون ( ضد عفوني شده ) براي آبکشي مواد گياهي و دستمال کاغذي سترون به عنوان يک سطح پاکي که بشود روي آن کار کرد، مورد نياز مي باشند.
کار هايي که با دست انجام مي شوند، مي توانند روي کاغذ انجام شوند. زماني که عمليات تمام شد، دستمال کاغي را مي شود به دور انداخت، و يک سطح سترون تازه اي را از فرآورده هاي سفرون بر مي گزبنيم. آب را مي توان در قالب هاي شيشه اي سترون کرد. کاغذ ها را در کيسه هاي کاغذي قرار دهيد و آنها را در ديگ زود پز، روي سطوح آبي بپزيد.
کيسه، در اتمام عمليات ضد عفوني، مرطوب خواهد شد.
کيسه را به يک دستگاه گرماسازي در 80 درجه ي سانتيگراد منتقل کنيد، و به کيسه اين امکان را بدهيد که داخل کوره خشک شود. کاغذ ها را تا زماني که مورد نياز نباشد، باز نکنيد.
ضد عفوني کردن مواد ( اجسام ) گياهي
همه ي مواد گياهي مي توانند در سفيد کننده هاي رقيق خانگي ضد عفوني شوند، براي مثال : White King ( 4 1 فنجان White King + 4 3 فنجان آب + يک قطره پاک کننده – پاک کننده اي که همچون سورفاکتانت عمل کند ). تکه هاي گياهي را در قالب هايي که سفيد کننده ها را به مدت 12-10 دقيقه در بر دارند. بارها آنها را به هم بزنيد. محلول کلر را به دور بريزيد، اين عمل باکتري و قارچ و گاهي اوقات برخي اجزاي گياه همچون پولکهاي بيروني و پاجوش هاي نرم را از بين خواهد برد.
تکه هاي گياهي را دو مرتبه با آب سترون شستشو دهيد.
عملياتي در جعبه هاي سترون
محافظت بيشتري بايد انجام شود تا اطمينان حاصل کنيد که کشت شما عاري از هر گونه آلودگي ( ناخالصي ) مي باشد. براي دست يابي به اين، شرح ذيل را انجام دهيد :
1. موهاي خودتان را به پشت سرتان گره بزنيد، آستين هاي خود را بالا بزنيد و ساعت و هر چيز ارزشمند ديگر را برداريد. ( باز کنيد ). دستهاي خود را کاملاً با محلول ضد عفوني که مناسب براي استعمال با پوست مي باشد، شستشو دهيد. اگر به هر شد عفوني کننده اي حساسيت داريد، دستهاي خودتان را با آب بشوييد و يک رستکش جراحي به دست کنيد.
2. درون جعبه را با افشاندن 70% الکل و با خشک کردن توسط پارجه ي ستروني، ضد عفوني کنيد.
3. کليه ي اقلامي را که شما در نزديکي يا درون جعبه نياز خواهيد داشت را جمع آوري و مرتب کنيد.
4. در داخل کابينت عمل کنيد و يک تکه ي ضد عفوني شده اي از ساقه را از قالب، با يک جفت پنس برداريد ( مواد گياهي را با دستتان لمس نکنيد ) .
ادوات خودتان را همچنين با فرو بردن آنها در الکل، بين هر دستکاري و مشتعل کردن آنها ضد عفوني ( سترون ) کنيد.
تکه هاي کوچک، داراي 3_2 سانتيمتر طول، و برگهاي اندک، مي توانند برش يابند، و به محيط کشت آگار منتقل شوند.
اگر برگها خيلي بزرگ بودند، آنها را نيز در اندازه هاي 2 1- 3 1 برچينيد يا ببريد.
يک قطعه ( تکه ) از پاجوش را داخل ظرف کشتي قرار دهيد ( مهم است که در اين مرحله تنها يک پاجوش در هر ظرف کشت داشته باشيم، براي اينکه اگر پاجوشي آلوده شد، نتواند به پاجوش هاي ديگر پخش شود ).
دريچه هاي ظروف کشت را ببنديد. قالب ها را در دماي اتاق دور از نور مستقيم خورشيد نگه داريد.
تکثير شاخه :
شاخه ها ممکن است درمرحله قبلي دراز شده باشند پس از گذشت 4 هفته ،آنها نياز دارند به آماده سازي که انتقال يابند به محيط کشت که حاوي شير نارگيل براي تکثير بيشتر است.
تکرار و استريل کردن محيط کشت ،ابزار ها و اتاقک . شما نيز بايد از قبل دستهايتان را استريل کرده باشيد.
انتقال ظرفهاي حاوي شاخه ها به يک طرف کابينت و محيط کشت استريل شده به طرف ديگران
استفاده کردن از پارچه هاي کاغذي ،پنس و چاقوهايي که قبلا استريل شده اند.
با يک جفت پنس ، ساقه ها را از ظرفهايشان برداشته و آنها را درسطح پارچه کاغذي استريل شده که مرطوب است قرار دهيد.
اين نکته مهم است که هميشه پارچه هاي کاغذي را مرطوب نگه داريد تا اينکه گياهان هميشه لطيف و ميتوانند به زودي خشک شوند.
شاخه هاي جدا شده مي توانند به شيشه هاي جديدي انتقال يابند. در اين مرحله حداکثر 5 تکه از گياهان ممکن است در درون هر ظرف قرار داده شود.
نگه داري کشت هايي که در مرحله قبل توسعه يافته اند . مرحله تکثير ممکن است تکرار شود. هر 4 هفته تا زماني که گياهان کافي بدست آمده باشد.
بطور کلي شاخه ها مي توانند تکثير شوند 3-4 دفعه از هر 4 هفته .
نکته مهم توجه کردن به اين نکته است براي جلوگيري از آلودگي در طي اين مرحله شما مي توانيد هواي آلوده را بگيريد زيرا اين هوا باعث کاهش بهداشت مي شود.
تشکيل ريشه :
زماني که شماشاخ ها را به اندازه کافي ثابت کرديد . شما مي توانيد اجازه رشد دهيد به آنها قبل از آنکه مراحل ريشه دهي شروع شود . شاخه ها به خاطر ريشه دهي به محيط کشتي که حاوي شير نارگيل و جوانه جواست انتقال مي يابند. حداکثر 5 شاخه در هر ظرف کشت قرار داده مي شود. ظرف ها در جايي که قبلا نگه داري مي شدند قرار ميگيرند . ريشه ها بايستس در عرض 2تا 4 هفته تشکيل شوند.
انتقال به آميخته گلداني :
عمل مهم در اين مرحله انتقال گياهان به فضاي آزاد است .گياهان ريشه دار شده بصورت زير نگهداري شوند:
پر کردن گلدانها با آميخته گلداني مناسب بدون هيچ حاصلخيزي وآب کافي و ثابت کردن ميزان آبياري .
انتقال گياهان ريشه دار شده از محيط کشت آگار با استفاده از يک جفت پنس .
شستشوي آگار ها با آب ولرم به علت وجود ريشه ها .
ايجاد حفره در محيط کشت آميخته خاکي و قرار دادن ريشه ها درداخل حفره ها به آرامي
اسپري کردن شاخ و برگ با استفاده از اسپري دستي حاوي آب،اين گلدانها مي توانند درداخل ظروف پلاستيکي بزرگتر با يکپوشش شيشه اي ودور از نور مستقيم آفتاب نگه داري شوند.
زماني که ريشه ها به اندازه کافي ثابت شدند و سازگاري يافتند . آنها مي توانند حاصلخيز شده و پرورش يابند مانند ساير درختان افزايش تدريجي نور نيز براي گياهان لازم است.
جهش زايي در درون شيشه :
موزهاي خوراکي اغلب پلي پلو ئيدهاي استريل هستند و بايد به طريقه رويشي از دياد يابند. از جهت اصلاح ژنتيکي با دورگه گيري امکانپذير نيست . روش جهش زايي پيشنهاد مي شود که يک پيشنهاد بسيار عالي براي نزديک شدن به اصلاح موز مي باشد. علاوه بر اين ، هتروزيگوت بودن کلون هاي غير جنسي موز آنها را برا ايجاد جهش مناسب مي سازد. حالت هاي هتروزيگوتي در مکان هاي ژني کوليتوارهاي ديپلوئيد Aa بوده در صورتي که انواع ژنوميکي تريپلوئيد مي تواند به شکل Aaa بوجود آيد. براي هيبريدها ي برون گونه اي ، اشکال هتروزيگوتي مي تواند به صورت AaB و Aab AAb, ABb, aBb,aBB باشد. ايجاد جهشي ممکن است فنوتيپ مغلوب را توسط تغيير ،باز داشتن يا حذف آلل هاي غالب مشابه به ظاهر کند . با استفاده از کشت نوک شاخه ها به منظور جهش زايي ، ايجاد جهش و توليد مونانت ها را آسان مي کند.
انتخاب بيشتر 60Gy GN-در مالزي منجر به تشخيص ميوه دهي زود رس در موز کاونديش شده بود که Vovaria نام گرفت. Matsunoto و Yumagushi موتانت مقاوم به آلومينيوم را که از طريق پرتو افکني پروتوکروم موز کاونديش بوجود آمد ه بود انتخاب کردند . Pisang Berangan يک موزمشهور که ميوه دهي ،گلدهي ،رنگ ،بافت گوشتي و اندازه دارد. به هر حال ،اين موز نسبتا گراز بوده و نيز خيلي زود به بيماري پژمردگي فوزارومي دچار مي شود و بيماري Freckle (لکه دار شدن ) باعث مي شود توسط Clod spurious mesa در نتيجه يک برنامه جهش زايي استفاده ازاعه گاما را براي القاء تنوع ژنتيکي آشنا کرد تا اينکه گياهان توانستند با يک يا چند صفت گلدهي انتخاب شوند:
تحمل به بيماري Panama
گياهان پا کوتاه
زود ميوه دهي ووزن خوشه اي بالا
اندام زايي توسط کالوس (در بنفشه آفريقايي )
در اين روش ، برا ي تکثير ريز نمونه ها ،کالوس بدست مي آيد که بعد ها به اندام هايي مانند شاخه و ريشه تبديل مي شوند. تمايز اندام بوسيله نسبت سيتوکنين به اکسين کنترل مي شود که اين نسبت در کشت بافت خيلي مهم است . ميزان کم هر دو براي کالوس زايي ضروري مي باشد . به هر حال ،اگر سطح سيتوکنين نسبت به سطح اکسين بالا باشد جوانه ها ظاهر مي شوند . اغلب جوانه هايي بدست مي آيند که بعدا خودشان بتوانند به آساني ريشه داده و قلمه چوب نرم توليد نمايند.
بنفشه آفريقايي يک گياه گلدار خانگي است. اين گياه مي تواند به آساني توسط قلمه تکثير يابد. همچنين آن مي تواند دورن شيشه نيز پرورش يابد. ريزازديادي يکي از روش هاي موفقيت آميز جهت توليد تجاري اين گياه مي باشد.
زماني که گوشوارک يا پهنک برگ روي محيط کشت Skog وMurashinge قرار مي گيرد که حاوي سطوح ويژه اي اکسين و سيتوکنين است.آنها کالوس هايي را تشکيل مي دهند که بعد مي تواند به اندام ها تمايز يابد. اين آزمايشات ،نقش اکسين و سيتوکنين را در تمايز ريشه ها و شاخه ها نشان مي دهد. محيط کشت هفته قبل آماده مي شود مگر آنکه شامل تنظيم کننده هاي رشد گياهي زير باشد :
BA 1 0 PPm و NAA 1 0 PPM .
برگهاي بنفشه آفريقايي را روي سطح استريل شده اي به مدت 10 دقيقه در ماده پاک کننده کلراکس قرار دهيد ،سپس 3 بار در آب استريل شده قرار دهيد و بعد از آن تقطير کنيد و در پتري ديش هاي استريل شده اي براي استفاديتان بگذاريد. .ضمنا موارد زير را رعايت کنيد.
از تکنيک هاي استريل استفاده کنيد و برگها را به پتريديش استريل شده يتان انتقال دهيد.
پهنک برگ را به صورت 6 متر مربع مساوي برش دهيد .( 5 1cm * 5 1 cm)
درب شيشه را باز کرده و دوقسمت از برگها و محيط کشت را در درون شيشه قرار دهيد و اين عمل رابراي شيشه هاي دوم وسوم نيز تکرار نماييد.
درب را سر جاي خود گذاشته و شيشه ها را در برابر هود ترانسفر قرار دهيد.
نبايد شيشه ها و درب هاي آنها بر چسب دار باشند.
همه گياهان را باد در هفته هاي آينده بتوانيد مشاهده کنيد.
تکنيک ها ي آلوده در کشت بافت :
در اطرافمان اسپورهاي قارچي و ساير ميکرو ار گانيسم ها قرار دارند . زماني که يک اسپور در مجاورت محيط کشت قرار مي گيريد ،شرايط براي رشد و جوانه زدن آنها مهيا است . هود هاي ترانسفر تحت شرايط فشار بالايي عمل مي کنند و به فيلترهاي هوا ي فوق العاده موثر (HEPA) مجهزند که تقريبا 3 اينچ ضخامت دارند. فيلتر هاي HEPA 99 99% در انتقال موادي به اندازه 3 0 ميکرول و يا بيشتر موثرند و لي باکتري و اسپورهاي قارچي توسط اين فيلتر ها شکار مي شوند . اگر شما از تکنيک هاي صحيح جهت کار کردن درون اين هود ها استفاده کنيد آلودگي کشت هاي بافت گياهي واقعا مي تواند حذف شود . نکات زير در به حداقل رساندن مشکلات کمک خواهد کرد :
ساعت و جواهرات خود را در آوريد و دستهايتان را بشوئيد.
اسپري کردن زياد دستها و بازوهايتان با اتانول 70% مهم است.
هر چيزي که وارد هود ترانسفر مي شود بايد استيل شود. اسپري کردن تک تک ابزارها ،شيشه ها و ساير ظروف با اتانول 70% مهم باشد.
در موقعيتي قرار گيريد که صورتتان در ارتباط با جريان هود حداکثر دستهايتان را بيرون از هود نگه داريد. براي دسترسي به داخل هود حداکثر بازوهايتان را دراز کنيد اما بازوهايتان را روي سطح کار قرار ندهيد.
اگر ضروري باشد که سرفه يا عطسه کنيد ، لطفا اين کار را به طرف هود انجام ندهيد . اگر شما هود را آلوده کنيد ،شما ممکن است نابود کنيد کشت هاي همه دانشجوياني که همراه شما هستند . اگر شما بدانيد که هود آلوده است ،لطفا آن را قبل ازاستفاده ديگران تغيير نماييد.
پنس ها ،چاقو ها و ساير ابزار ها را تک به تک روي شعله بگيريد. ابزار ها را در الکل 95% قرار داده و سپس به مدت کوتاهي از روي شعله بگذاريد . الکل ها در بار دوم گرما دادن ابزار ها براي استريل کردن آنها ضروري نيست وچاقو ها و پنس هاي گرم به بافت گياهي آسيب خواهند رساند.

مقدمه بافت چوبي از پروکامبيوم بوجود مي‌آيد و پروکامبيوم از مريستم انتهايي ناشي مي‌شود بافت چوبي واجد ديواره نخستين را که از پروکامبيوم گياه ايجاد مي‌ش ...

سه عامل مهم در کشت قارچ: اسپان، بستر، محيط در اين درس به شرايط محيطي و بستر مناسب خواهيم پرداخت و مختصري نيز در مورد اسپان و تهيه آن بحث خواهيم کرد و ...

مثلثي است متساوي الاضلاع که هر ضلع آن مربوط به 3 عنصر اصلي هر خاک يعني ماسه، سيلت و رس است. براي اينکه بدانيم نمونه خاک در چه محدوده بافتي قرار مي گير ...

● بررسي روش هاي تصفيه آب خانگي و کاربرد آنها دستگاههاي تصفيه آب خانگي براي حذف يا کاهش مواد زائد آب آشاميدني بکار ميروند. اين مواد عمدتا عبارتند از : ...

ما در خانه برخي مواد را نگهداري و مرتبا مورد مصرف قرار مي دهيم که در حقيقت سمي بوده و براي سلامت ما و محيط زندگي مان مضرند، اما به دليل ناآگاهي احتياط ...

توت فرنگي ميوه اي نسبتا جديد است که تا ۳۰۰ ۲۵۰ سال قبل به اين شکل امروزي وجود نداشت و بيشتر موارد استفاده دارويي داشته است. در قرن چهاردهم در فرانسه ت ...

مقدمه هر يک از گياهان براي داشتن رشد مطلوب نياز به شرايط خاصي از نظر شدت نور ، دماي روزانه ، دماي شبانه ، ميزان رطوبت نسبي هوا و رطوبت خاک دارند . برا ...

● مقدمه هوايي که از آن تنفس مي کنيم مملو از موجودات بسيار ريز است که با باد به حرکت درمي آيند. قارچ ها، باکتريها، ويروسها و گياهان براي انتقال گرده ها ...

دانلود نسخه PDF - کشت بافت خانگي